購物車
幫助
021-54845833/15800441009
大鼠AXL受體酪氨酸激酶(AXL)ELISA試劑盒
簡介
AXL受體酪氨酸激酶（AXL），也被稱為酪氨酸蛋白激酶受體UFO（UFO），是由AXL基因編碼的酶，該基因最初被命名為UFO，這與它的功能不明有關，但是，自其被發現以來的幾年中，對AXL的表達譜和機制的研究使其成為一個越來越有吸引力的目標，特別是對于癌癥治療而言，近年來，它已成為癌細胞免疫逃逸和耐藥性的主要促進劑，可導致侵襲性和轉移性癌癥，它是一種細胞表面受體酪氨酸激酶，是TAM家族的一部分，包括TYRO3和MERTK，它的特征在于細胞外結構，由兩個纖連蛋白3型重復序列和兩個免疫球蛋白樣重復序列及其細胞內酪氨酸激酶結構域組成，AXL受體通過結合維生素K依賴性蛋白生長停滯特異性基因6等生長因子將來自細胞外基質的信號轉導到細胞質中。
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術:將捕獲抗體包被于酶標板上，捕獲樣品及標準品中的待測物AXL，清洗后，再加入生物素標記的檢測抗體進行孵育后清洗，形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復合物，隨后加入鏈霉親和素偶聯的辣根過氧化物酶進行孵育，待孵育結束后清洗，接著加入TMB顯色后，若樣本中有待測物則顯藍色，加入終止液停止反應。檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣本中AXL的濃度。
需要的其他材料
1. 酶標儀，包含450nm測定波長，同時包含600-680nm校正波長更佳；
2. 移液器及槍頭；
3. 蒸餾水或去離子水；
4. 100-1000 mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機；
6. 水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀釋標準品和樣品的試管。
樣品保存
樣品收集后若在 1 周內進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個月內檢測），或-80℃（6個月內檢測），避免反復凍融，標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
試劑準備工作
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
試劑盒中取出標準品，準備7個試管，先從3μg/mL標準品（200μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至150ng/mL（例：50μL的標準品母液+950μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的150ng/mL濃度標準品），隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液，在這6個單獨的試管中將150ng/mL標準品依次2倍倍比稀釋至6個梯度，共配制7個濃度的標準品，依次為: 150ng/mL、 75ng/mL、 37.5ng/mL、 18.75ng/mL、 9.38ng/mL、 4.69ng/mL、 2.35ng/mL，從最高濃度標準品溶液中吸取500μL標準品到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進行標準品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標準品(0ng/mL)。
抗體工作液配置
使用前10分鐘，將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液，根據所需用量當日配置當日使用。
酶結合物工作液配置
使用前10分鐘，將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液，根據所需用量配置。
備 注：如待測樣本中AXL濃度高于標準品最高值，請根據實際情況選擇適當的稀釋倍數。
結果的計算
計算標準品和樣本復孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出四參數邏輯函數的標準曲線(作圖時去掉空白組的值)。或者使用能夠生成四參數邏輯（4-P）曲線擬合的計算機軟件來創建標準曲線。若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應的稀釋倍數。
示例數據
標準品濃度(ng/mL)
150
75
37.5
18.75
9.38
4.69
2.35
0
OD值
2.507
1.762
0.991
0.652
0.371
0.266
0.183
0.06
校正OD值
2.447
1.702
0.931
0.592
0.311
0.206
0.123
0
以下數據和曲線僅供參考，實驗者需根據自己的實驗數據建立標準曲線。
下圖所示標準曲線僅供示例，結果計算應以同次試驗標準品所繪標準曲線為準計算樣本結果
重復性
板內變異系數小于10%，板間變異系數小于10%。
靈敏度
經樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為1.18ng/mL。
特異性
該試劑盒測定可識別重組大鼠AXL。
其他相關蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL，并測定交叉反應性。沒有觀察到明顯的交叉反應。
使用ELISA試劑盒之前，請您必須完整閱讀說明書，本產品僅供科研使用，不得用于臨床診斷和治療。
