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  • 人腫瘤易感基因101(TSG101)ELISA試劑盒

    規(guī)格:
    價格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-E1483
    • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
    • 英文名 :Human TSG101 ELISA KIT
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 靈敏度 :0.16ng/mL
    • 規(guī)格 :48T/96T
    • 檢測范圍 :0.313 ~ 20ng/mL
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人腫瘤易感基因101(TSG101)ELISA試劑盒

簡介
腫瘤易感基因101,也被稱為TSG101,是一種編碼同名細(xì)胞蛋白的基因,該基因編碼的蛋白質(zhì)屬于一組明顯無活性的泛素偶聯(lián)酶同系物,該基因產(chǎn)物包含一個盤繞的線圈結(jié)構(gòu)域,與stathmin相互作用,stathmin是一種與腫瘤發(fā)生有關(guān)的胞質(zhì)磷酸蛋白,該蛋白質(zhì)可能在細(xì)胞生長和分化中發(fā)揮作用,并充當(dāng)負(fù)生長調(diào)節(jié)劑,該腫瘤易感基因的體外穩(wěn)態(tài)表達(dá)似乎對維持基因組穩(wěn)定性和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)很重要,該基因的突變和替代剪接在乳腺癌中發(fā)生頻率很高,并表明缺陷發(fā)生在乳腺癌腫瘤發(fā)生和/或進(jìn)展過程中,它的主要作用是參與ESCRT通路,該途徑促進(jìn)了反向拓?fù)涿妊亢投嗯蒹w(MVB)的形成,其將預(yù)定降解的貨物輸送到溶酶體
檢測原理

本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù) : 將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上,捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測物TSG101,清洗后,再加入生物素標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行孵育后清洗,形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復(fù)合物,隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進(jìn)行孵育,待孵育結(jié)束后清洗,接著加入TMB顯色后,若樣本中有待測物則顯藍(lán)色,加入終止液停止反應(yīng)。檢測過程中游離的成分均被洗去,用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值,顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中TSG101的濃度
需要的其他材料
1. 酶標(biāo)儀,包含450nm測定波長,同時包含600-680nm校正波長更佳;
2. 移液器及槍頭;
3. 蒸餾水或去離子水;
4. 100-1000 mL刻度量筒;
5. 洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機(jī);
6. 水平軌道微孔板振蕩器,能夠保持500±50 rpm的速度;
7. 用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
樣品保存
樣品收集后若在 1 周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測),或-80℃(6個月內(nèi)檢測),避免反復(fù)凍融,標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。
試劑準(zhǔn)備工作
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液(20×)有晶體析出,需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋(例如:1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水)
標(biāo)準(zhǔn)品配置
試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品,準(zhǔn)備7個試管,先從400ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品(200μL)按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至20ng/mL(例:50μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+950μL的1×稀釋液,制備得到1000μL的20ng/mL濃度標(biāo)準(zhǔn)品),隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液,在這6個單獨的試管中將20ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品依次2倍倍比稀釋至6個梯度,共配制7個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,依次為:   20ng/mL、 10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、 1.25ng/mL、 0.625ng/mL、 0.313ng/mL,從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取500μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個試管中,輕輕吹打混勻,以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋(如圖所示),1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0ng/mL)。


人(TSG101)ELISA試劑盒

抗體工作液配置
使用前10分鐘,將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液,根據(jù)所需用量當(dāng)日配置當(dāng)日使用。
酶結(jié)合物工作液配置
使用前10分鐘,將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液,根據(jù)所需用量配置。

注:如待測樣本中TSG101濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值,請根據(jù)實際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。

結(jié)果的計算

計算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時去掉空白組的值)。或者使用能夠生成四參數(shù)邏輯(4-P)曲線擬合的計算機(jī)軟件來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

示例數(shù)據(jù)


以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實驗者需根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)

20

10

5

2.5

1.25

0.625

0.313

0

OD值

2.491

1.603

1.075

0.721

0.364

0.229

0.197

0.056

校正OD值

2.435

1.547

1.019

0.665

0.308

0.173

0.141

0


下圖所示標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供示例,結(jié)果計算應(yīng)以同次試驗標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線為準(zhǔn)計算樣本結(jié)果

人(TSG101)ELISA試劑盒


重復(fù)性

板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于10%。

靈敏度

經(jīng)樣本測試,本試劑盒的檢測靈敏度為0.16ng/mL。
特異性

該試劑盒測定可識別重組TSG101

其他相關(guān)蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL,并測定交叉反應(yīng)性。沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。

使用ELISA試劑盒之前,請您必須完整閱讀說明書,本產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床診斷和治療

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