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021-54845833/15800441009
基本信息
細(xì)胞品牌 ：通蔚生物
細(xì)胞規(guī)格 ：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
細(xì)胞英文 ：CTLL-2
基本形態(tài) ：圓形，單個(gè)或呈片
傳代方法 ：1 : 2
培養(yǎng)條件 ：氣相：空氣，95%；CO2,5% ；溫度：37℃
生長(zhǎng)特性 ：懸浮生長(zhǎng)
消化時(shí)間 ：2-3分鐘
凍存條件 ：無血清細(xì)胞凍存液
完全培養(yǎng)基 ：RPMI1640+10%FBS+100U/ml rmIL-2(重組小鼠白介素-2)+1.0μg/mL Con A＋1% P/S CTLL-2完全培養(yǎng)基
培養(yǎng)環(huán)境 ：37℃，5%CO2，95%AIR
供應(yīng)范圍 ：僅供科研使用
細(xì)胞特征 ：該細(xì)胞是源自C57BL/6的細(xì)胞毒性的T淋巴細(xì)胞，其生長(zhǎng)依賴IL-2
注意事項(xiàng) ：1. 該細(xì)胞為IL-2依賴型細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)室可以常備 IL-2，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)不好，散在細(xì)胞變多，細(xì)胞不生長(zhǎng)等情況，以 100U/mL 的濃度添加 IL-2，培養(yǎng) 2-3 天后狀態(tài)會(huì)有改善；
2. 該細(xì)胞凍存后再復(fù)蘇需要2周左右時(shí)間來調(diào)整狀態(tài)，調(diào)整過程中細(xì)胞碎片較多，具體操作請(qǐng)咨詢技術(shù)支持，在技術(shù)支持的指導(dǎo)下進(jìn)行，且該細(xì)胞凍存條件為90%FBS+10%DMSO。
2. 該細(xì)胞凍存后再復(fù)蘇需要2周左右時(shí)間來調(diào)整狀態(tài)，調(diào)整過程中細(xì)胞碎片較多，具體操作請(qǐng)咨詢技術(shù)支持，在技術(shù)支持的指導(dǎo)下進(jìn)行，且該細(xì)胞凍存條件為90%FBS+10%DMSO。
到貨處理
1、收到細(xì)胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。
1、收到細(xì)胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。
2、將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復(fù)蘇。
3、復(fù)蘇第一管如有活性狀態(tài)問題及時(shí)與我們聯(lián)系，會(huì)有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管。
特別說明：未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。
細(xì)胞復(fù)蘇
1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。
1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。
2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。
3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種 T25 培養(yǎng)瓶，于 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞傳代
1、方法一：收集細(xì)胞懸液，至離心管中 1000rpm 離心 5min，棄上清，加 1-2mL 完全培養(yǎng)基重懸，按 1 ：2 的比例進(jìn)行分瓶傳代，補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，放入 37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
1、方法一：收集細(xì)胞懸液，至離心管中 1000rpm 離心 5min，棄上清，加 1-2mL 完全培養(yǎng)基重懸，按 1 ：2 的比例進(jìn)行分瓶傳代，補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，放入 37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2、方法二：可選用半換液方式，將 T25 瓶子豎起來，輕輕拍打兩下，在培養(yǎng)箱靜置 10 分鐘，肉眼可見大部分細(xì)胞沉在底部，輕輕吸去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分瓶，補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存
1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次。
1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次。
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。
3、棄上清，沉淀細(xì)胞加入 1ml/支的無血清凍存液，混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液）
4、將凍存細(xì)胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小時(shí)以上。
T25細(xì)胞到貨處理
觀察
收到細(xì)胞后，請(qǐng)及時(shí)核對(duì)培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購的細(xì)胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。
收到細(xì)胞后，請(qǐng)及時(shí)核對(duì)培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購的細(xì)胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。
處理
1、75%酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
1、75%酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2、顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40x,100x,200x 各一張）前三天照片為重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。
3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
4、收到細(xì)胞后，及時(shí)查看說明書是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞形態(tài)，并按常規(guī)貼壁或懸浮細(xì)胞的傳代方法操作。
懸浮
1、將 T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm 離心 5min，收集上清（后期對(duì)比培養(yǎng)使用），加 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè) T25），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（傳代時(shí)建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng)。）
1、將 T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm 離心 5min，收集上清（后期對(duì)比培養(yǎng)使用），加 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè) T25），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（傳代時(shí)建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng)。）
注意：如收到密封培養(yǎng)瓶，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時(shí)要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松
細(xì)胞予重發(fā)
1.細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。
2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。
3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。
4.常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。
5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時(shí)且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。
6.細(xì)胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。
細(xì)胞不予重發(fā)
1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。
2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。
3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。
4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。
5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。
6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的，不重發(fā)。
