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021-54845833/15800441009
基本信息
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細胞名稱 |
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細胞品牌 |
通蔚生物 |
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細胞規(guī)格 |
1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細胞英文 |
KP-2 |
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細胞來源 |
JCRB |
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細胞簡介 |
我們推薦使用KP-2細胞株繁殖腺病毒相關重組病毒。 KP-2源自普遍使用的 HEK293細胞株，但產(chǎn)生的病毒滴度更高。 HEK293細胞是剪切過的腺病毒5型DNA轉(zhuǎn)染的人胚腎細胞。 跟HEK293細胞一樣，KP-2細胞反式表達腺病毒E1基因，當共轉(zhuǎn)染三個AAV助質(zhì)粒(一個含ITR的質(zhì)粒，pAAV-RC, 和E1缺失助質(zhì)粒)時，可以產(chǎn)生有感染力的腺病毒-相關病毒顆粒 |
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種屬來源 |
人 |
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組織來源 |
胰腺 |
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患者性別 |
女 |
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患者年齡 |
65 |
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疾病特征 |
正常 |
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細胞形態(tài) |
上皮細胞樣 |
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生長特性 |
貼壁生長 |
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培 養(yǎng) 基 |
PMI1640，90%；FBS，10% |
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生長條件 |
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃ |
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傳代方法 |
1：2至1：6，每周2次 |
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凍存條件 |
90%完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存 |
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病毒測試 |
CMV(-), EBV(-), HHV6(-), HHV7(-), BKV(-), JCV(-), ADV(-), parvoB19(-), HBV(-), HTLV1(-), HTLV2(-), HIV1(-), HIV2(-), HPV18(-) [-/negative, +/positive, nt/not tested] |
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傳代細胞數(shù) |
3 x 10^4個細胞/60 mm培養(yǎng)皿 |
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支原體檢測 |
陰性 |
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發(fā)貨方式 |
快遞運輸(特殊情況的另處理) |
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供應范圍 |
僅限于科研實驗使用，不得用于其它用途 |
接受后處理
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處理1 |
收到細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們 |
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處理2 |
請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h |
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處理3 |
棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基 |
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處理4 |
如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司的完全培養(yǎng)基 |
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處理5 |
接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系 |
細胞操作
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復蘇細胞 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
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細胞傳代 |
如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng): |
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1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 |
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2. 加 1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 |
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3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。 |
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4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
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細胞凍存 |
待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類: |
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1. 棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入1ml 胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 |
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2. 4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。 |
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3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
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注意事項 |
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 |
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2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。 |
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3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。 |
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4. 靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待細胞匯合度80%左右時正常傳代。 |
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5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。 |
售后服務
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細胞予重發(fā) |
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1. 細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)。 |
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2. 收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。 |
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3. 收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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4. 常溫發(fā)貨細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細胞復蘇2天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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5. 常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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6. 細胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。 |
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細胞不予重發(fā) |
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1. 客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)。 |
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2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。 |
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3. 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。 |
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4. 細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。 |
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5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。 |
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6. 收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。 |
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特別說明 |
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上海通蔚生物客戶在細胞培養(yǎng)過程中，有任何技術問題可以撥打免費服務電話021-54845833或15800441009，我們隨時給予實驗中的免費解答。 |
