產品及特點：
人皰疹病毒 6 型（Human Herpesvirus-6，HHV-6）屬皰疹病毒科β亞科，為 1986 年從淋巴增生性疾病和艾滋病患者淋巴細胞中培養獲得的一種新病毒。HHV-6 病毒顆粒呈球形，有包膜，平均直徑約為 150 納米，基因組為線狀雙鏈DNA。其基因結構和抗原性與其他已知的 5 種皰疹病毒不同。HHV-6 為嗜淋巴細胞病毒，可在 T 型及 B 型淋巴細胞內復制。根據抗原性不同，又可將 HHV-6分為 A、B 兩組。HHV-6 與人巨細胞病毒(HCMV /HHV-5)宿主相似，主要感染CD4+T 細胞、CD8+T 細胞、單核巨噬細胞和 NK 細胞，亦可在唾液腺、乳腺、腎臟中潛伏并持續進行低密度復制。
病毒在淋巴細胞內復制時可產生明顯的細胞病變，并最終導致宿主細胞破裂、溶解。HHV-6 可通過唾液飛沫及密切接觸、輸血或器官移植傳播。除免疫低下外，絕大多數人感染后終身都不會產生明顯癥狀；免疫低下者，潛伏的病毒可被激活并產生急性感染癥狀，此時會出現間質性肺炎、腦炎、腦膜炎、肝炎及多器官衰竭等癥狀，活化的病毒可大規模感染 T 淋巴細胞，使免疫功能進一步削弱，最后對人體健康產生較大影響，因此人皰疹病毒 6 型的快速準確鑒定對該病的預防和治療有著重要作用。本產品就是以探針法熒光定量PCR 技術為基礎開發的專門檢測人皰疹病毒 6 型的試劑盒。
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經過優化，靈敏性高。
3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據人皰疹病毒6型高度保守區設計，不會跟其他病毒 DNA發生交叉反應。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應。
規格及成分：
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編號
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成分
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規格
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試劑一
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2×Probe qPCR MagicMix
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500μL(本色蓋)
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試劑二
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熒光PCR專用模板稀釋液
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1mL(黃蓋)
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試劑三
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人皰疹病毒6型qPCR引物混合液
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100μL(白蓋)
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試劑四
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人皰疹病毒6型qPCR探針
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50μL(棕色管)
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試劑五
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人皰疹病毒6型探針法qPCR陽性對照(1×10E8/μL)
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50μL(紅蓋)
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使用手冊
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1 份
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運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。
自備試劑：
樣品DNA。
使用方法：
一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)：
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。
6. 放冰上待用。重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備：
7. 如果有 N 個樣品，最好設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 陽性對照的 10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數 DNA 提取試劑盒兼容。
三、Probe qPCR反應(20μL體系，在樣品制備室進行)：
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于 PCR 陽性對照（用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加）：
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成份
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N+2 個樣品管
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PCR 陰性對照管
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標準曲線樣品管2-7管
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2×Probe qPCR MagicMix
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10μL
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10μL
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各10μL
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人皰疹病毒6型qPCR探針
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1μL
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1μL
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各1μL
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人皰疹病毒6型探針法qPCR引物混合液
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2μL
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2μL
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各2μL
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N+2個待測DNA模板
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7μL
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超純水
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7μL
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第7步所得標準曲線樣品稀釋液2-7號
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各7μL2號樣到2號管,3號樣到3號管
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11. 蓋上蓋子后上機，按下面參數進行PCR：
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過程
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溫度
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時間
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預變性
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95℃
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3 min
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PCR反應40個循環
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95℃
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15 sec
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60℃
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1 min(采集FAM通道的熒光信號)
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四、數據處理：
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 RNA濃度的 log 值，再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復一次。若重復結果 Ct值小于 40，擴增曲線有明顯起峰，該樣本判斷為陽性，否則為陰性。
五、特別提示：
本公司的所有產品，僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
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