隱孢子蟲(chóng)通用PCR試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium spp.)為體積微小的球蟲(chóng)類(lèi)寄生蟲(chóng)。廣泛存在多種脊椎動(dòng)物體內(nèi)，寄生于人和大多數(shù)哺乳動(dòng)物的主要為微小隱孢子蟲(chóng)，由微小隱孢子蟲(chóng)引起的疾病稱(chēng)隱孢子蟲(chóng)病，是一種以腹瀉為主要臨床表現(xiàn)的人畜共患性原蟲(chóng)病。病程可遷延數(shù)月至 1 年。病人常并發(fā)腸外器官隱孢子蟲(chóng)病，如呼吸道和膽道感染，使得病情更為嚴(yán)重復(fù)雜。隱孢子蟲(chóng)感染常為 AIDS 病人并發(fā)腹瀉而死亡的原因。因此快速準(zhǔn)確診斷隱孢子蟲(chóng)具有重要意義。

為此本公司基于 PCR 原理開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供DNA模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專(zhuān)一性強(qiáng)，只擴(kuò)增隱孢子蟲(chóng)通用，與其他病原沒(méi)有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分：

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色）
試劑三	隱孢子蟲(chóng)通用 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	隱孢子蟲(chóng)通用 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8 /μL）	50 μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存：

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：

樣品DNA。

使用方法：

一、樣品 DNA 的制備：

1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 隱孢子蟲(chóng)通用PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：

3. 對(duì)N+2個(gè)樣品，在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照，故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2 個(gè)樣品管	PCR 陰性對(duì)照	PCR陽(yáng)性對(duì)照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
隱孢子蟲(chóng)通用PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個(gè)樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 陰性對(duì)照（水）	--	18μL	--
PCR 陽(yáng)性對(duì)照（隱孢子蟲(chóng)通用PCR陽(yáng)性對(duì)照1000倍稀釋液）	--	--	18μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過(guò)程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán)	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測(cè)：

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。

四、特別提示：

本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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