幼蟲芽胞桿菌(美洲蜂幼蟲腐臭病)PCR試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

幼蟲芽孢桿菌（Bacillus larvae）是引起美洲蜂幼蟲腐臭病（Americanfoul brood）的病原。美洲蜂幼蟲腐臭病又名爛子病，是蜜蜂幼蟲和蛹的一種細(xì)菌性、急性、毀滅性病害。特征為病蜂的蜂蓋子脾下陷、穿孔、封蓋幼蟲死亡、蛹蟲現(xiàn)象等。美洲蜂幼蟲腐臭病最初發(fā)生于英國，以后傳到歐美各國，截止至 2011 年全世界均有發(fā)生。美洲蜂幼蟲腐臭病不但危害性大，而且一旦發(fā)生就很難根除。輕者影響蜂群繁殖和采集力，重者造成蜂群的覆滅，因此幼蟲芽孢桿菌快速檢測(cè)具有重要的意義。

本試劑盒根據(jù) PCR 原理開發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增幼蟲芽胞桿菌（美洲蜂幼蟲腐臭病），與其他病原沒有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分：

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色）
試劑三	幼蟲芽胞桿菌（美洲蜂幼蟲腐臭病） PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	幼蟲芽胞桿菌（美洲蜂幼蟲腐臭病） PCR 陽性對(duì)照（1×10E8 /μL）	50 μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存：

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：

樣品DNA。

自備試劑：

一、樣品 DNA 的制備：

1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容?？梢赃x用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加10μL幼蟲芽胞桿菌（美洲蜂幼蟲腐臭?。㏄CR 陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：

3. 對(duì)N+2個(gè)樣品，在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照，故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2 個(gè)樣品管	PCR 陰性對(duì)照	PCR陽性對(duì)照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
幼蟲芽胞桿菌（美洲蜂幼蟲腐臭病）PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個(gè)樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 陰性對(duì)照（水）	--	18μL	--
PCR 陽性對(duì)照（幼蟲芽胞桿菌（美洲蜂幼蟲腐臭?。?/span>PCR陽性對(duì)照1000倍稀釋液）	--	--	18μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán)	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測(cè)：

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。

四、特別提示：

本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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