埃希氏菌屬通用PCR試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

埃希氏菌屬（Escherichia spp.）包括大腸埃希氏菌,即埃希氏菌屬通用(Escherichia coli)、傷口埃希氏菌(Escherichia vulneris)、弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)、赫氏埃希氏菌(Escherichia hermanii)和塞內(nèi)加爾埃希氏菌(E .senegalensis)等菌種, 是動(dòng)物腸道正常菌群之一，但在某些條件下, 如機(jī)體防御機(jī)能降低或?yàn)E用抗生素等, 此菌可進(jìn)入機(jī)體的其他部位引起感染。以往對腸道菌群的研究主要依賴對腸黏膜和糞便細(xì)菌的分離培養(yǎng)鑒定, 可以分離的細(xì)菌種類有限，因此快速靈敏檢測埃希氏菌具有重要的意義，本試劑盒就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)，

1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增埃希氏菌屬通用，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分：

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1mL（亮黃色）
試劑三	埃希氏菌屬通用PCR引物混合液	100μL（白蓋）
試劑四	埃希氏菌屬通用PCR陽性對照1×10E8 /μL	50μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存：

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：

樣品 DNA。

使用方法：

一、樣品 DNA 的制備：

1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對照和一個(gè)樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL埃希氏菌屬通用PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：

3. 對N+2個(gè)樣品，在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽性對照和一個(gè)PCR陰性對照，故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2個(gè)樣品管	PCR陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各20μL	20μL	20μL
埃希氏菌屬通用PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個(gè)樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR陰性對照(水)	--	18μL	--
PCR陽性對照埃希氏菌屬通用PCR陽性對照1000倍稀釋液	--	--	18μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán)	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測：

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。

四、特別提示：

本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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