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021-54845833/15800441009
產品及特點：
副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus）是一種海洋細菌，主要來源于魚、蝦、蟹、貝類和海藻等海產品。進食含有該菌的食物可致食物中毒，也稱嗜鹽菌食物中毒。潛伏期自 1 小時至 4 天不等，多數為 10 小時左右，起病急驟，常有腹痛、腹瀉、嘔吐、失水、畏寒及發熱，腹痛多呈陳發性絞痛，常位于上腹部、臍周或回盲部，腹瀉每日 3～20 余次不等，大便性狀多樣，多數為黃水樣或黃糊便，約 2%～16%呈典型的血水或洗肉水樣便，部分病人的糞便可為膿血樣或粘液血樣，對人體健康具有巨大危害，因此快速檢測具有重要意義。本產品基于 PCR 原理實現同時對副溶血性孤菌 toxR/tdh/trh 三重毒力基因的檢測，
1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經過精心優化，專一性強，只擴增副溶血性弧菌toxR/tdh/trh三重，與其他病原沒有交叉反應。
3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
規格及成分：
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編號 |
成分 |
規格 |
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試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1 mL（紅蓋） |
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試劑二 |
超純水 |
1 mL（亮黃色） |
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試劑三 |
副溶血性弧菌toxR/tdh/trh三重PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑四 |
副溶血性弧菌toxR/tdh/trh三重PCR 陽性對照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
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試劑五 |
使用手冊 |
1 份 |
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。
自備試劑：
樣品 DNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 副溶血性弧菌toxR/tdh/trh三重PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設置 PCR 反應(40μL 體系)：
3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：
|
成份 |
N+2 個樣品管 |
PCR 陰性對照 |
PCR陽性對照 |
|
PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
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副溶血性弧菌toxR/tdh/trh三重PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
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N+2個樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
|
PCR 陰性對照(水) |
-- |
18μL |
-- |
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PCR 陽性對照副溶血性弧菌toxRtdhtrh三重PCR陽性對照1000倍稀釋液 |
-- |
-- |
18μL |
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過程 |
溫度 |
時間 |
|
預變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應35個循環 |
95℃ |
30 sec |
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55℃ |
30 sec |
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72℃ |
40 sec |
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最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix 在 擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示：
本公司的所有產品，僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
