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021-54845833/15800441009
產品及特點：
美洲幼蟲腐臭病 (American foulbrood ， AFB) 是 由 幼蟲芽孢桿菌(Paenibacillus larvae)引起的蜜蜂幼蟲和蛹的一種細菌性、急性、毀滅性傳染病，其典型癥狀為封蓋后死亡的幼蟲巢房蓋變潮濕、下陷、顏色發暗并顯油光，大部分巢房蓋穿孔，患病幼蟲蟲體變軟，失去正常白色和光澤，逐漸變成淡褐色至棕黑色。AFB 一旦在蜂場發生，極易造成幼蟲死亡和蜂群群勢衰弱，且很難徹底清除，給養蜂業造成重大經濟損失。世界動物衛生組織(OIE)將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為二類動物疫病和進境動物檢疫疫病。本產品是根據 PCR 原理開發的幼蟲芽孢桿菌檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經過精心優化，專一性強，只擴增幼蟲芽孢桿菌，與其他病原沒有交叉反應。
3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
規格及成分：
|
編號 |
成分 |
規格 |
|
試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1 mL（紅蓋） |
|
試劑二 |
超純水 |
1 mL（亮黃色） |
|
試劑三 |
幼蟲芽孢桿菌 PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
|
試劑四 |
幼蟲芽孢桿菌 PCR 陽性對照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
|
試劑五 |
使用手冊 |
1 份 |
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。
自備試劑：
樣品 RNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 幼蟲芽孢桿菌 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設置 PCR 反應(40μL 體系)：
3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：
|
成份 |
N+2 個樣品管 |
PCR 陰性對照 |
PCR陽性對照 |
|
PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
|
幼蟲芽孢桿菌PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
|
N+2個樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
|
PCR 陰性對照（水） |
-- |
18μL |
-- |
|
PCR 陽性對照（幼蟲芽孢桿菌PCR陽性對照1000倍稀釋液） |
-- |
-- |
18μL |
4. 按下表設置 PCR 反應：
|
過程 |
溫度 |
時間 |
|
預變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應35個循環 |
95℃ |
30 sec |
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55℃ |
30 sec |
|
|
72℃ |
40 sec |
|
|
延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix 在 擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示：
本公司的所有產品，僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
