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021-54845833/15800441009
產品及特點：
?？刹《?ECHO Virus)是一種 RNA 病毒，只對人類有感染性，多發于夏、秋季，絕大多數是隱性感染。病毒感染的臨床表現類似于風疹，第一孕季感染雖可累及胎兒，但很少引起畸形，常見的癥狀為上呼吸道感染、發燒、非化膿性腦膜炎和皮疹，皮疹為斑丘疹或麻疹樣皮疹，持續 1-3 天自然消退。因此靈敏快捷的診斷產品具有重要的意義。本產品根據 PCR 原理開發，可用于科研領域快速檢測?？刹《尽?/span>
它具有下列特點：
1. 一站式，用戶不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。
2. 根據?？刹《镜谋Ｊ鼗蛐蛄性O計的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產品只能用于科研，不能用于臨床。
規格及成分：
|
編號 |
成分 |
規格 |
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試劑一 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL(橘黃蓋) |
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試劑二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL(紅蓋) |
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試劑三 |
超純水 |
1 mL(亮黃蓋) |
|
試劑四 |
?？刹《?/span>RT-PCR 引物混合液 |
100 μL(白蓋) |
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試劑五 |
?？刹《?/span> RT-PCR 陽性對照(1×10E8 /μL) |
50 μL(黃蓋) |
|
試劑六 |
使用手冊 |
1 份 |
運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑：
樣品 RNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照)，一個是NC(樣品制備陰性對照)?？梢杂?10μL?？刹《綪CR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ?。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容?？梢赃x購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設置RT- PCR 反應(20μL 體系)：
3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
|
成份 |
N+2 個 樣品管 |
RT-PCR 陰性對照 |
RT-PCR 陽性對照 |
|
5×雙酶一管式RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
|
埃可病毒 RT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL |
2μL |
2μL |
|
N+2 個制備的 RNA 樣品 |
各 12.5μL |
-- |
-- |
|
超純水 |
-- |
12.5μL |
-- |
|
?？刹《?/span> RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液 |
-- |
-- |
12.5μL |
|
MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
|
過程 |
溫度 |
時間 |
|
逆轉錄 |
42℃ |
30 min |
|
預變性 |
95℃ |
5 min |
|
PCR反應35個循環 |
95℃ |
30 sec |
|
58℃ |
30 sec |
|
|
72℃ |
20 sec |
|
|
最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物，則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、陽性對照必須有預期條帶出現，才有必要分析樣品的實驗結果，如果有預期片段大小的擴增產物則為陽性，如果無則為陰性。
四、特別提示：
本公司的所有產品，僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
