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產品簡介
產品名稱 ：小鼠小腦顆粒細胞
產品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：腦組織
產品規格 ：5×105cells/T 25細胞培養瓶
細胞簡介
小鼠小腦顆粒細胞分離自小腦皮層組織。神經元是神經系統最基本的結構與功能單位，小腦顆粒神經元是體積較小的神經元，直徑約10μm ，在中樞神經系統中含量非常豐富，近乎神經元數量的一半。
由于小腦神經元的生長、分化和大腦皮層神經元相似，而且數量多、便于取材，因此小腦顆粒神經元是研究神經元生長發育、神經軸突再生及神經疾病發生機制和臨床神經藥理的重要手段。小腦顆粒神經元是小腦主要的中間神經元，在哺乳動物的小腦內數量最為豐富。
顆粒神經元的軸突與苔狀纖維和爬行纖維相聯系，形成小腦皮層內的神經元環路，在小腦的神經活動中起著非常重要的作用。
在動物傳染性海綿狀腦病中，病變可波及小腦顆粒神經元，導致小腦皮層的神經元環路受損，從而呈現神經性行為失調。
研究小腦顆粒神經元在動物傳染性海綿狀腦病病理學變化中的反應、病理發生的機理特別是分子機理，有賴于小腦顆粒神經元細胞模型的建立。
小腦顆粒細胞的軸突是沿冠狀軸分布的平行纖維，正是這種排列保證了興奮的單向傳導，這是小腦功能理論中的關鍵假設，小腦顆粒細胞通過g-氨基丁酸接受戈爾吉細胞的抑制性突觸的信息傳入。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的小鼠小腦顆粒細胞采用胰蛋白酶消化法結合神經元專用培養基、化學試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的小鼠小腦顆粒細胞經N SE免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml)
培 養 基 ：含B -27、P enicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態 ：神經元細胞樣
傳代特性 ：屬于終末分化細胞。屬于不增殖細胞群
傳代比例 ：不傳代
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
小鼠小腦顆粒細胞體外培養周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的最佳培養狀態。
細胞培養狀態
發貨時發送細胞電子版照片
使用方法
小鼠小腦顆粒細胞是一種貼壁細胞，細胞形態呈神經元細胞樣，在通蔚生物技術部標準操作流程下，細胞屬于終末分化細胞。屬于不增殖細胞群。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 神經元細胞消化一
1) 吸出T 25細胞培養瓶中的培養基，用P B S(37℃預熱) 清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液0. 5m L至培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，37℃溫浴1min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4) 待細胞完全貼壁后，培養觀察。之后按換液頻率更換新鮮的完全培養基(37℃預熱) 。
3. 神經元細胞消化二
1) 吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液0. 5m L至培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，4℃冰箱靜置5min。消化后倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4) 待細胞完全貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養基(37℃預熱) 。
4. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm ，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液0. 5m L至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min (或4℃冰箱靜置5-7min) 。消化完向離心管內加入5ml完全培養基終止消化。
3) 經1000rpm ，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養基(補加1% FBS，促進貼壁) 重懸沉淀，接種于新的培養瓶內。
4) 待細胞完全貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養基(37℃預熱) 。
5. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ （2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/ml），明膠（0. 1% ），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
特殊注意事項
5. 神經元細胞貼壁不牢，必須包被培養器皿。細胞遇冷易收縮脫落，所用試劑需37℃預熱，室溫觀察時間不宜過長。
